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本制品是采用SYBR Green I嵌合荧光法进行Real time PCR的专用预混试剂，具有方便、快速、灵敏度高、重复性好等诸多特点。预混液中已经将精心优化的反应缓冲液、Taq DNA聚合酶、dNTPs、SYBR Green I等试剂预混在一起，是一种2×浓度的预混型试剂，进行实验时，PCR反应液的配制十分简单方便。本制品使用新型抗体修饰的HotStart Taq DNA聚合酶，从而有效抑制低温下的非特异性扩增，提高反应特异性和扩增效率，非常适用于高特异性的qPCR反应，能够在更宽广的范围内进行准确定量。

同时，本制品利用不同染料混合后产生的变色效应可以有效追踪移液过程，有助于减少移液错误，防止漏加模板。此外，本制品已预混低浓度ROX Reference Dye II，可用于仪器校正孔间荧光信号误差。

• 高特异性：采用新型工艺制备抗体修饰的HotStart Taq DNA聚合酶，无需热启动即可进行PCR反应，大大提高PCR扩增的特异性。
  
• 高效：精心配制的RealTime PCR专用2×SuperMix，具有更高的扩增效率和扩增灵敏度。
  
• 快捷：PCR反应所必需试剂集于一管之中，数分钟即可完成反应体系配制。

• 使用：请上下颠倒轻轻混合均匀，避免起泡，并经轻微离心后使用。反应液的配制、分装请使用新的（无污染的）枪头、Microtube等，避免污染。建议反应体积为20～50μL。
  
• 引物设计：一般为了增加灵敏度及扩增效率且抑制非特异性反应，扩增目标序列越短越好。建议设计成200bp以下。

• 常用反应体系
  

  成分	用量
  2×SYBR Color qPCR SuperMix(Low ROX)	10μL
  上游引物	0.2～1.0μM(终浓度)
  下游引物	0.2～1.0μM(终浓度)
  模板	1～2μL
  RNase-Free Water	至20μL

  注：本试剂盒可以实现移液追踪：2×SYBR Color qPCR SuperMix(Low ROX)呈现蓝色，而10x Dilution buffer含有黄色染料呈现出红黄色。当2×SYBR Color qPCR SuperMix(Low ROX)中加入10×Dilution buffer（黄色）后会产生绿色的变色效应，从而可以根据液体颜色变化准确判断出是否加入模板。
  具体操作：10×Dilution buffer为专用浓缩模板稀释液，先用水将模板稀释至目标浓度后，每9μL模板中加入1μL的10×Dilution buffer（总的使用原则为最终模板中Dilution buffer浓度为1×）。已含有Dilution buffer的模板使用体积1～5μL/20μL reaction，推荐2μL/20μL reaction。
  
• 常用PCR循环
  两步法可获得高特异性，三步法可获得高扩增率，用户根据需要选择合适的扩增程序。
  
  • 两步法扩增程序：
    

    温度	时间	循环数
    95℃	1分钟	1
    95℃	20秒	35～45
    60℃	1分钟

  • 三步法PCR扩增程序：
    

    温度	时间	循环数
    95℃	1分钟	1
    95℃	20秒	35～45
    50～60℃	20秒
    72℃	30秒